灃德生物科技 Fengde Biotechnology
Fengde Biotech Scientific Article

Biotium 螢光二抗選擇指南

從 CF® Dye、高交叉吸附二抗到 F(ab’)₂、Mouse isotype-specific 與 STORM single-label，整理 Biotium 螢光二抗的主要特色與選型邏輯，協助研究人員快速依 Primary Antibody 物種與儀器雷射選擇合適產品。

← 返回 Biotium 產品資訊

為什麼螢光二抗的選擇很重要？

在免疫螢光（Immunofluorescence, IF）、共軛焦顯微鏡、流式細胞分析與螢光 Western Blot 中，二級抗體會直接影響訊號強度、背景值、多重染色能力與影像穩定性。

Biotium 的螢光二抗以自有的 CF® Dye 為核心，產品線涵蓋一般型、Highly Cross-Adsorbed、F(ab’)₂ fragment、Mouse isotype-specific 以及 STORM 專用 single-label 二抗，並提供從 UV、可見光、far-red 到 near-infrared 的多波段選擇。

Biotium CF® Dye 二抗的主要特色

高亮度與光穩定性

CF® Dye 系列設計重點包含高螢光亮度、良好 photostability、水溶性與抗體 conjugation 相容性，適合 microscopy 與多色螢光分析。

涵蓋完整光譜

從 405 nm、488 nm、532/561 nm、633/640 nm 到 near-IR 波段均有對應染料，可搭配常見顯微鏡與流式平台。

多樣化二抗格式

除了常規 IgG 二抗，也包含 Highly Cross-Adsorbed、F(ab’)₂、isotype-specific 與 STORM single-label，方便針對不同實驗需求選擇。

CF® Dye 常見螢光波段對照

Biotium CF® DyeEx/Em 約值常見通道／用途
CF®350347 / 448 nmUV / DAPI-like channel
CF®405S404 / 431 nm405 nm laser
CF®405M408 / 452 nm405 nm laser
CF®430426 / 498 nmBlue-green
CF®488A490 / 515 nm488 nm / FITC / Alexa Fluor 488 類通道
CF®514516 / 548 nmGreen-yellow
CF®532527 / 558 nm532 nm
CF®543541 / 560 nm532/543 nm
CF®555555 / 565 nm561 nm / Alexa Fluor 555 類通道
CF®568562 / 583 nm561 nm / Alexa Fluor 568 類通道
CF®583R585 / 609 nmOrange-red
CF®594593 / 614 nmAlexa Fluor 594 / Texas Red 類通道
CF®633630 / 650 nm633 nm
CF®640R642 / 662 nm640 nm
CF®647650 / 665 nm640 nm / Alexa Fluor 647 / Cy5 類通道
CF®660C / CF®660R約 663–667 / 682–685 nmFar-red
CF®680 / CF®680R約 680 / 698–701 nmFar-red / NIR
CF®740742 / 767 nmNear-IR
CF®750755 / 777 nmNear-IR
CF®770770 / 797 nmNear-IR
CF®790784 / 806 nmNear-IR
CF®800797 / 816 nmNear-IR

實際可購買染料種類會依二抗宿主與 target species 而不同，選型時仍應以原廠當前產品頁為準。

Highly Cross-Adsorbed：多色 IF 的重點系列

Highly Cross-Adsorbed 二抗會針對其他物種免疫球蛋白進一步吸附，以降低非目標 IgG 的交叉反應，特別適合 multiplex immunofluorescence、同一組織使用多種 species primary antibody、共軛焦顯微鏡及高背景樣品。

Secondary antibodyPrimary antibody 來源適合情境
Donkey Anti-MouseMouseMultiplex IF、Mouse + Rabbit 組合
Donkey Anti-RabbitRabbitMultiplex IF、共軛焦顯微鏡
Donkey Anti-GoatGoat多物種 panel
Donkey Anti-RatRatMouse/Rat panel
Donkey Anti-Guinea PigGuinea Pig神經科學與組織染色
Donkey Anti-ChickenChicken多重染色
Donkey Anti-SheepSheep多物種 panel
Goat Anti-MouseMouse一般 IF / Multiplex
Goat Anti-RabbitRabbit一般 IF / Multiplex
Goat Anti-RatRat免疫與組織研究
Goat Anti-ChickenChicken多重染色
Goat Anti-Guinea PigGuinea Pig神經科學等應用
Goat Anti-Alpaca VHHAlpaca VHH / NanobodyNanobody-based assay
Rabbit Anti-MouseMouse特定 host 組合需求
Rabbit Anti-RatRat特定 host 組合需求
Rabbit Anti-SheepSheep特定 host 組合需求
Bovine Anti-GoatGoat特殊多物種組合

灃德版｜Biotium Highly Cross-Adsorbed 螢光二抗矩陣

以下將 Biotium 原廠的 Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibodies 重新整理成客戶選型矩陣。✓ 代表原廠產品列表目前有該二抗 × CF® Dye 組合；— 代表官方矩陣目前未列出。

最常用四組： Donkey Anti-Mouse、Donkey Anti-Rabbit、Goat Anti-Mouse、Goat Anti-Rabbit 已用淡色列標示。多色 IF / multiplex staining 建議優先從這四組開始，再依 primary antibody species 與 laser/filter 選 CF® Dye。
✓ 原廠目前有此組合 — 官方矩陣目前未列 Ex/Em 單位：nm
Secondary antibody CF®350347/448CF®405S404/431CF®405M408/452CF®430426/498CF®488A490/515CF®514516/548CF®532527/558CF®543541/560CF®555555/565CF®568562/583CF®583R585/609CF®594593/614CF®633630/650CF®640R642/662CF®647650/665CF®660C667/685CF®660R663/682CF®680681/698CF®680R680/701CF®740742/767CF®750755/777CF®770770/797CF®790784/806CF®800797/816
Bovine Anti-Goat————✓——✓—✓✓✓✓✓——————————
Donkey Anti-Chicken✓———✓——✓———✓✓———————————
Donkey Anti-Goat✓—✓—✓——✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓——
Donkey Anti-Guinea Pig—✓✓—✓——✓✓✓✓✓✓——✓—✓———✓——
Donkey Anti-Mouse (Min X Rat)✓——✓✓✓—✓✓✓✓✓✓✓✓—✓—✓✓——✓✓
Donkey Anti-Rabbit✓✓—✓✓——✓✓✓✓✓✓✓✓—✓✓✓✓✓✓✓✓
Donkey Anti-Rat✓✓——✓——✓—✓✓✓✓✓✓✓—✓—✓✓———
Donkey Anti-Sheep✓———✓——✓✓✓✓✓✓✓✓——✓——————
Goat Anti-Alpaca VHH————✓————✓—✓—✓✓——✓——————
Goat Anti-Chicken——✓—✓——✓✓✓✓✓✓✓✓✓————————
Goat Anti-Guinea Pig—✓✓—✓——✓✓✓✓✓—✓✓✓✓✓✓——✓——
Goat Anti-Mouse✓—✓✓✓—✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓—✓✓✓✓✓✓—
Goat Anti-Mouse (Min X Rat)—✓✓—✓——✓—✓✓✓✓✓—✓————————
Goat Anti-Rabbit✓—✓✓✓—✓✓✓✓✓✓✓✓✓✓—✓✓✓—✓✓✓
Goat Anti-Rat✓—✓—✓——✓✓✓✓✓✓✓✓✓—✓———✓——
Rabbit Anti-Mouse✓———✓——✓✓✓✓✓✓✓✓——✓——————
Rabbit Anti-Rat————✓————✓✓✓✓✓——————————
Rabbit Anti-Sheep————✓——✓✓———✓———————————

資料整理日期：2026-09-07。依 Biotium 官方 Secondary Antibody Product Listings 整理；產品組合可能隨原廠新增或停產而變動，正式報價／訂購前建議再確認最新 Cat. No.。 查看 Biotium 官方完整列表

客戶快速判讀：常用二抗有哪些 CF® Dye？

常用 Highly Cross-Adsorbed 二抗目前官方列出的 CF® Dye
Donkey Anti-Mouse (Min X Rat)CF®350, CF®430, CF®488A, CF®514, CF®543, CF®555, CF®568, CF®583R, CF®594, CF®633, CF®640R, CF®647, CF®660R, CF®680R, CF®740, CF®790, CF®800
Donkey Anti-RabbitCF®350, CF®405S, CF®430, CF®488A, CF®543, CF®555, CF®568, CF®583R, CF®594, CF®633, CF®640R, CF®647, CF®660R, CF®680, CF®680R, CF®740, CF®750, CF®770, CF®790, CF®800
Goat Anti-MouseCF®350, CF®405M, CF®430, CF®488A, CF®532, CF®543, CF®555, CF®568, CF®583R, CF®594, CF®633, CF®640R, CF®647, CF®660C, CF®680, CF®680R, CF®740, CF®750, CF®770, CF®790
Goat Anti-RabbitCF®350, CF®405M, CF®430, CF®488A, CF®532, CF®543, CF®555, CF®568, CF®583R, CF®594, CF®633, CF®640R, CF®647, CF®660C, CF®680, CF®680R, CF®740, CF®770, CF®790, CF®800

最常用二抗與可選 CF® Dye

Goat Anti-Mouse IgG

適合 Mouse primary antibody。Highly Cross-Adsorbed Goat Anti-Mouse 常見 CF® Dye 包括：

CF®350CF®405MCF®488A CF®543CF®555CF®568 CF®583RCF®594CF®633 CF®640RCF®647CF®660C CF®660RCF®680CF®680R CF®740CF®750CF®770

Goat Anti-Rabbit IgG

適合 Rabbit primary antibody，主要選項涵蓋 CF®350、CF®405S、CF®405M、CF®430、CF®488A、CF®532、CF®543、CF®555、CF®568、CF®583R、CF®594、CF®633、CF®640R、CF®647、CF®660C、CF®680、CF®680R、CF®740、CF®770、CF®790。

Donkey Anti-Mouse IgG

適合多重染色。常見 Highly Cross-Adsorbed 配置包含 CF®350、CF®430、CF®488A、CF®543、CF®555、CF®568、CF®583R、CF®594、CF®633、CF®640R、CF®647、CF®660R、CF®680R、CF®740、CF®770、CF®790、CF®800。

Donkey Anti-Rabbit IgG

可選染料非常完整，常見包括 CF®350、CF®405S、CF®430、CF®488A、CF®514、CF®543、CF®555、CF®568、CF®583R、CF®594、CF®633、CF®640R、CF®647、CF®680、CF®680R、CF®740、CF®750、CF®770、CF®790、CF®800。

Mouse Isotype-Specific 二抗

如果同一個實驗同時使用多支 Mouse primary antibody，一般 Anti-Mouse IgG 無法區分不同 monoclonal antibody。Biotium 提供 isotype-specific 二抗，可依 Mouse IgG subtype 進一步區分。

二抗可辨識應用
Goat Anti-Mouse IgG1Mouse IgG1Mouse isotype multiplex
Goat Anti-Mouse IgG2aMouse IgG2aMouse isotype multiplex
Goat Anti-Mouse IgG2bMouse IgG2bMouse isotype multiplex
Goat Anti-Mouse IgG3Mouse IgG3Mouse isotype multiplex
Goat Anti-Mouse IgM μ-chainMouse IgMIgM-specific detection
範例： Mouse IgG1 primary 搭配 Anti-Mouse IgG1–CF®488A，Mouse IgG2a primary 搭配 Anti-Mouse IgG2a–CF®594，即可在同一樣品上做 isotype-based multiplex staining。

F(ab’)₂ Fragment 二抗

Biotium 亦提供部分 Goat Anti-Mouse IgG F(ab’)₂ 與 Goat Anti-Rabbit IgG F(ab’)₂。F(ab’)₂ 缺少 Fc region，在具有大量 Fc receptor 的樣品中，有助於降低 Fc-mediated nonspecific binding。

  • Macrophage
  • Monocyte
  • Dendritic cell
  • Immune tissue
  • Fc receptor-rich samples

常見可選染料包括 CF®488A、CF®543、CF®555、CF®568、CF®594、CF®633、CF®640R、CF®647、CF®680、CF®750 等。

STORM 超解析顯微鏡專用 Single-Label 二抗

對 STORM / super-resolution microscopy，Degree of Labeling（DOL）可能影響定位精度與定量。Biotium 另外提供平均 DOL 約為 1 的 single-label secondary antibodies。

CF® DyeSTORM Single-Label
CF®498✓
CF®505✓
CF®535ST✓
CF®568✓
CF®583R✓
CF®597R✓
CF®647✓
CF®660C✓
CF®680✓
CF®750✓

如何快速選擇 Biotium 螢光二抗？

Step 1｜確認 Primary Antibody 的宿主物種

Primary antibody優先搜尋二抗
MouseGoat / Donkey Anti-Mouse
RabbitGoat / Donkey Anti-Rabbit
RatGoat / Donkey Anti-Rat
GoatDonkey / Bovine Anti-Goat
Guinea PigGoat / Donkey Anti-Guinea Pig
ChickenGoat / Donkey Anti-Chicken
SheepDonkey / Rabbit Anti-Sheep
Alpaca VHH / NanobodyGoat Anti-Alpaca VHH

Step 2｜單色還是多色染色？

單色 IF 可使用一般 secondary antibody；如果是 multiplex IF，建議優先選擇 Highly Cross-Adsorbed 規格。

Step 3｜依儀器 Laser / Filter 選 CF® Dye

儀器雷射建議 CF® Dye
UVCF®350
405 nmCF®405S / CF®405M
488 nmCF®488A
532/561 nmCF®543 / CF®555 / CF®568
561/594 nmCF®594
633/640 nmCF®633 / CF®640R / CF®647
Far-redCF®660R / CF®680
Near-IRCF®740 / CF®750 / CF®770 / CF®790 / CF®800

常見 3–4 色 IF 配色範例

三色 IF

CF®488A — Green

CF®568 — Orange/Red

CF®647 — Far-red

DAPI — Nucleus

四色 IF

CF®405M

CF®488A

CF®568 或 CF®594

CF®647

選色原則

若 nuclei 已使用 DAPI，通常避免再將 405 nm 通道配置給主要 marker，並優先利用 green、orange/red 與 far-red 分離訊號。

Biotium 二抗的選型優勢

Biotium 的價值不只是 CF® Dye，而是可用以下邏輯進行組合：

Primary Species × Secondary Host × Cross-Adsorption × Antibody Format × CF® Dye

因此同一個 Rabbit primary antibody，可以選擇 Goat Anti-Rabbit、Donkey Anti-Rabbit 或 F(ab’)₂ Anti-Rabbit，再搭配 CF®488A、CF®568、CF®594、CF®640R、CF®647 到 near-IR 等不同波段，能靈活應用於：

  • Immunofluorescence microscopy
  • Confocal microscopy
  • Multiplex IF
  • Flow cytometry
  • Fluorescent Western blot
  • STORM / Super-resolution microscopy

需要協助選擇 Biotium 螢光二抗？

提供 Primary Antibody 物種、需要的螢光顏色、目前使用的 Alexa Fluor® / FITC / Cy® Dye，或顯微鏡雷射波長與 filter 設定，即可進一步協助篩選適合的 Biotium CF® Dye 二抗。

參考資料